5-HTR2C重组质粒电转染至大鼠海马神经元对细胞活性的影响

作者： 王杰琼 [1,2] ; 高冬梅 [2,3] ; 于艳红 [2,3] ; 张媛媛 [1,2] ; 张惠云 [1,2]

摘要：目的：5-羟色胺2C受体在抑郁症的发病及治疗机制中发挥重要的作用,模拟5-HTR2C表达的异常升高,建立5-HTR2C高表达的细胞模型,为抑郁症治疗药物的开发提供平台。方法：采用课题组前期已构建5-HTR2C真核表达载体;按试剂盒方法提取5-HTR2C重组质粒;并取新生24 h内Wistar乳鼠海马,制备海马神经元,按试剂盒方法对质粒进行电转染,并于荧光显微镜下观察转染效果;将所培养细胞分为：非转染细胞（NTC）和转染细胞（TC）,转染细胞分为：转染组（TC＋5-HTR2C质粒）、空质粒组（TC＋空质粒）、激动剂组（TC＋激动剂）;为确定激动剂组细胞提取蛋白的时间,分别于加入激动剂后0、5、10、20、40、60 min提取蛋白,Western-blot检测;待各组细胞处理后,采用Western-blot检测5-HTR2C以及MEK/P-MEK的表达,以验证5-HTR2C重组质粒转染后是否仍有活性。结果：海马神经元电转染后48 h后,神经元数量较多,电转染率及生存率最高;体外培养的海马神经元中加入激动剂m CPP后5 min至60 min,MEK磷酸化水平逐渐升高,在20 min时MEK磷酸化水平已较高;与NTC相比,TC＋5-HTR2C质粒和TC＋激动剂组中P-MEK的蛋白水平明显升高。结论：5-HTR2C重组质粒导入海马神经元后48 h细胞生长良好,死亡率低,细胞饱满,电转染率较高,可于此时收集细胞。激动剂组可在m CPP与细胞共培养后20-60 min间收集细胞。通过比较TC＋5-HTR2C质粒组及TC＋激动剂组,发现加入激动剂的细胞中MEK磷酸化水平较前者要强。因此,5-HTR2C重组质粒转染至海马神经元中后仍具有生理活性,说明5-HTR2C重组质粒的转染比较成功。

关键字： 5-HTR2C重组质粒 电转染 大鼠海马神经元 抑郁症

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