镇肝熄风汤含药血清激活Nrf2/ARE信号通路对6-OHDA诱导PC12细胞氧化应激的保护作用

作者： 赵学梅 徐天娇 董妙先    齐齐哈尔医学院药学院 齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院医药科学研究所 齐齐哈尔161006

摘要：目的：研究镇肝熄风汤含药血清对6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）致PC12细胞氧化应激的保护作用及其相关机制。方法：应用镇肝熄风汤低剂量（8 g·kg^-1）、中剂量（16 g·kg^-1）和高剂量组（32 g·kg^-1）大鼠的含药血清或空白血清预处理PC12细胞1 h后,加100μM 6-OHDA共孵育24 h后收集细胞。二氯荧光素双醋酸盐（DCFH-DA）荧光探针染色法结合荧光酶标仪检测活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）水平,采用实时定量PCR检测核转录因子E2相关因子2（Nuclear Factor-erythroid 2 Related Factor 2,Nfe2l2））基因Nfe2l2、血红素加氧酶-1（Heme Oxygenase-1,HO-1）、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基（Glutamate-CysteineLigase Catalyticsubunit,GCLc）和调节亚基（GCLm）mRNA表达。采用荧光素酶报告基因系统检测抗氧化反应元件（Antioxidant Response Element,ARE）活性。结果：镇肝熄风汤含药血清抑制了6-OHDA诱导的氧化应激,上调了6-OHDA处理细胞中Nfe2l2、HO-1和GCLc mRNA表达,但是对GCLm mRNA表达没有显著影响。结论：镇肝熄风汤含药血清对6-OHDA诱导PC12细胞氧化应激具有保护作用,其机制可能与上调Nfe2l2 mRNA表达,使ARE激活进一步诱导其下游II相解毒酶基因和抗氧化酶基因HO-1和GCLc mRNA表达有关。

关键字： 镇肝熄风汤 6-羟基多巴胺 活性氧簇 Nfe2l2 抗氧化反应元件 含药血清

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