气血并治方有效组分对缺氧/复氧损伤心肌保护作用的机制研究

作者： 于永慧 张佩 刘剑刚 李澎 张大武 王承龙

摘要：目的:观察气血并治方组分配伍(Components of water extract from Qixue Bingzhi Recipe,CWQB)对缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)损伤心肌细胞的保护作用,探讨其改善心肌能量代谢从而防止细胞凋亡的相关性机制.方法:分离、提取、培养出生1-2天的SD乳鼠原代心肌细胞,缺氧3h复氧2h制作H/R模型,分为Control组(正常氧组)、H/R组(缺氧/复氧模型)、TMZ组(缺氧/复氧模型+100μmol/L曲美他嗪(Trimetazidine,TMZ))和CWQB组(缺氧/复氧模型+1mmol/L气血并治方有效组分).采用高效液相色谱分析法(High Performance Liquid Chromato-graph,HPLC)测定各组细胞高能磷酸化合物-一磷酸腺苷(Adenosine mono-phosphate,AMP)、二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate,ADP)、三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)的含量并计算总腺苷酸量(Total adenylic acid,TAN)、能荷(Energy charge,EC)水平;酶联免疫吸附法(Enzyme linked immuno sorbent assay,ELISA)法检测心肌细胞损伤标志物肌酸激酶同工酶(Creatine kinase-MB,CK-MB)、肌钙蛋白T(Troponin,cTnT)水平,流式细胞术检测心肌细胞早期凋亡率.Pearson相关性检验分析心肌损伤标志物、早期凋亡率与高能磷酸化合物含量之间的关系.结果:与H/R组比较,TMZ组、CWQB组AMP含量下降,ADP、ATP含量和TAN、EC水平均有所升高,其中TMZ组ADP、ATP、TAN升高程度较CWQB组更为显著(p＜0.05);TMZ组、CWQB组CK-MB、cTnT含量显著下降,其中CWQB组cTnT含量下降更为显著(p＜0.05);TMZ组、CWQB组早期凋亡率有所下降,TMZ组下降更为显著(p＜0.05).相关性分析显示,CK-MB水平与ADP浓度呈显著负相关;早期凋亡率与AMP浓度呈显著正相关,与ADP、ATP浓度呈负相关(P＜0.01).结论:CWQB能够在降低H/R心肌细胞AMP浓度,升高ADP、ATP浓度和TAN、EC水平的同时,减轻心肌损伤标志物CK-MB、cTnT含量,抑制心肌细胞的早期凋亡率,从而发挥对H/R损伤心肌细胞的保护作用.

关键字： 气血并治方 有效组分 缺氧复氧心肌细胞 保护作用 高能磷酸化合物 心肌损伤

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