光谱法研究炎琥宁与牛血清白蛋白的相互作用

作者： 刘里 ; 杨晓丽 ; 成飞翔

摘要：目的：研究炎琥宁（YHN）与牛血清白蛋白（BSA）之间的相互作用,为后续琥宁类药物的研发和进一步探讨炎琥宁在生物体内与蛋白质的作用机制提供理论依据。方法：在优化的实验条件下,运用荧光猝灭光谱法、紫外光谱法和同步荧光光谱研究炎琥宁与BSA的相互作用。283.15 K、298.15 K和313.15 K温度下,根据S-V方程计算出猝灭常数（KSV）和速率常数（Kq）;根据L-B双倒数方程计算出静态猝灭结合常数（KLB）;根据双对数方程计算出结合常数（Kb）和结合位点数（n）;根据热力学公式计算出焓变（ΔH）、熵变（ΔS）和吉布斯自由能变（ΔG）;根据Hill方程计算出Hill系数（n H）。结果：3个温度下的BSA荧光强度随着炎琥宁浓度升高,有规律地降低;KSV、Kq、KLB、Kb、n和n H值随着温度升高而降低;ΔG〈0,ΔH〈0,ΔS〈0;n约等于1;n H大于1。结论：炎琥宁与BSA形成基态复合物从而猝灭BSA的内源性荧光,猝灭机理为静态猝灭。通过计算反应热力学参数值,可推断炎琥宁与BSA作用力主要为氢键和范德华力。炎琥宁与BSA可形成一个结合位点,表明炎琥宁与BSA之间具有一定的结合作用,炎琥宁在体内可被蛋白质储存和转运。生成自由能变ΔG为负值,表明炎琥宁与BSA的作用过程是一个自发过程。n H大于1,表明炎琥宁有正协同作用。两者的结合部位主要位于亚螺旋域ⅡA中。同步荧光光谱表明炎琥宁对BSA构象产生一定的影响,使BSA腔内疏水环境的极性减弱,结合位点更接近于酪氨酸。

关键字： 炎琥宁 牛血清白蛋白 荧光猝灭 相互作用

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